荧光光谱仪样品激发效率低？激发波长选择与样品制备标准化流程

荧光光谱仪样品激发效率低，可从激发波长选择和样品制备两方面优化，以下是标准化流程：

激发波长选择标准化流程

1.收集样品信息

明确样品的化学成分和结构，可通过化学分析方法如红外光谱、核磁共振等确定，不同结构对不同波长光吸收和激发特性不同。

查阅相关文献，了解同类样品常用激发波长范围及对应荧光特性。

2.初步扫描

使用荧光光谱仪的全波长扫描功能，在仪器推荐的波长范围内对样品进行扫描，得到激发光谱和发射光谱。

观察激发光谱，找出峰值较高且尖锐的波长区域，这些波长可能是较优激发波长。

3.优化选择

根据初步扫描结果，选择几个可能的激发波长进行进一步测试。

固定发射波长为样品特征发射峰对应波长，分别以不同激发波长激发样品，测量荧光强度。

对比不同激发波长下的荧光强度，选择荧光强度最高且信噪比良好的波长作为最终激发波长。

4.验证确认

重复测量多次，确保所选激发波长下荧光强度稳定。

结合样品实际应用需求，如检测灵敏度、选择性等，验证所选激发波长的适用性。

样品制备标准化流程

溶液样品

1.试剂选择与纯化

选用高纯度试剂，避免杂质干扰荧光信号。对可能含杂质试剂进行纯化处理，如蒸馏、重结晶等。

2.溶剂选择

根据样品性质选择合适溶剂，确保样品在溶剂中完全溶解且稳定。常用溶剂有水、乙醇、甲醇等，要考虑溶剂对荧光的影响，如某些溶剂会淬灭荧光。

3.浓度控制

配制不同浓度样品溶液，测量荧光强度，绘制浓度荧光强度曲线。选择在曲线线性范围内且荧光强度适中的浓度作为测定浓度。

4.溶液稳定性处理

若样品溶液不稳定，可加入稳定剂，如缓冲溶液维持pH值稳定，抗氧化剂防止氧化等。

将配制好溶液置于合适容器中，密封保存，避免光照、温度变化等因素影响。

固体样品

1.样品预处理

对于块状固体样品，需研磨成细粉，增加比表面积，提高激发效率。研磨过程中注意防止污染，可在玛瑙研钵中进行。

若样品含水分或其他挥发性物质，可进行干燥处理，控制干燥温度和时间，避免样品分解或性质改变。

2.分散与压片

将处理好的固体粉末均匀分散在合适载体上，如溴化钾等惰性物质，制成压片。

使用压片机在适当压力下压片，保证片子致密均匀，提高光透过率和激发效率。

3.样品厚度控制

控制压片厚度，过厚会使光散射增加，过薄则信号弱。可通过多次实验确定合适厚度。